凝胶迁移实验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是一种用于研究 DNA 结合蛋白与特定 DNA 序列相互作用的技术。
基本原理是:将标记(如放射性同位素、荧光或生物素等)的 DNA 片段(包含感兴趣的特定序列)与蛋白质提取物共同孵育。如果存在能够与该特定 DNA 序列结合的蛋白质,那么这些蛋白质会与 DNA 结合形成复合物。由于蛋白质的结合,复合物在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率会发生改变,与未结合蛋白质的游离 DNA 片段相比,迁移速度变慢。通过凝胶电泳和放射自显影(或其他检测方法),可以观察到这种迁移率的变化,从而推断出蛋白质与 DNA 序列的相互作用。
EMSA 技术常用于以下研究:
1. 确定转录因子与特定调控序列的结合。
2. 分析 DNA 结合蛋白的活性和特异性。
3. 研究蛋白质-DNA 相互作用的条件和机制。
该技术具有灵敏、简便等优点,但也存在一些局限性,例如可能会出现非特异性结合等问题。
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