数字 PCR(digital PCR,dPCR)是一种核酸分子**定量技术。它将核酸样品分配到大量独立、平行的微反应单元(nl,纳升级别)中,使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子,并在此基础上进行扩增、检测和分布统计,从而实现靶标分子的**计数。
数字 PCR 的主要过程包括样品的分散、PCR 扩增以及荧光信号的采集与数据分析。在有限稀释模式下,样品模板随机分散到众多的独立反应单元中,每个反应单元中可能包含有零个、一个或多个 DNA 模板分子,模板分子的分散符合泊松分布。PCR 扩增结束后,有荧光信号的单元记为 1,无荧光信号则记为 0,即根据荧光信号的有无将反应单元分别定义为阳性和阴性。通过对反应单元总数和阳性反应单元数目进行统计,再根据泊松分布公式即可计算出 DNA 模板分子的起始浓度。
与**、二代 PCR 技术相比,数字 PCR 具有以下优势:
• 特异性强、灵敏度高:能够检测出低丰度的核酸分子,对稀有突变的检测具有重要意义。
• **定量,准确性好:不依赖标准曲线和内参,可直接得到核酸的**拷贝数,定量结果更准确。
• 抗干扰能力强:微反应单元相互独立、封闭,避免了 PCR 抑制剂及不同核酸分子扩增产物间的相互干扰。
然而,数字 PCR 也存在一些局限性,例如因需要对反应体系进行拆分和分配,对模板量有一定要求,模板量过多会导致无法定量,过少会导致信号过低;对引物的特异性要求也较高。
数字 PCR 技术在许多领域都有广泛应用,如:
• 感染性**检测:可用于病毒检测,能检测出荧光定量 PCR 检测过程中错过的感染;可进行临床样本病毒载量评估,为采样方法的选取提供参考;还能用于监测环境病毒载量等。
• 癌症液体活检:**检测转移到血液循环中的肿瘤细胞和 DNA 片段,提供基因突变情况等信息,动态监控病人病程的发展,为伴随诊断和个性化**提供可靠依据。
• 无创产前检查:有望实现准确、快速、简便的产前筛查。
• 其他方面:在二代测序文库质控和结果验证、环境及食品检测等领域,可作为**、二代 PCR 技术的重要补充手段凯奥嘉生物专注于医药、临床诊断、实验室封板膜,微孔板热封膜产品的开发、生产及销售,并可根据客户多样化需求进行产品定制与项目合作。 凯奥嘉生物致力于为客户提供更为合理优化的样本密封解决方案,持续助力生命健康产业的发展。
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