外泌体的提取与纯化方法主要有以下几种:
1. 超速离心法
这是*常用的方法之一。首先通过低速离心去除细胞和细胞碎片,然后逐步提高离心速度,分离出不同大小和密度的颗粒,*终得到外泌体。该方法的优点是纯度较高,但操作较为繁琐,且可能会导致外泌体的损失和聚集。
2. 超滤法
利用超滤膜的孔径选择性,将样品通过超滤膜,截留外泌体。这种方法相对简单快速,但可能会存在杂蛋白的污染。
3. **亲和捕获法
基于外泌体表面的特异性标志物,如 CD63、CD81 等,使用相应的抗体进行亲和捕获。该方法特异性强,但可能受到抗体亲和力和特异性的影响。
4. 尺寸排阻色谱法
根据外泌体和其他杂质颗粒的大小差异进行分离。其优点是能较好地保持外泌体的完整性和生物活性,但处理量相对较小。
5. 沉淀法
使用聚乙二醇等试剂,通过改变溶液的离子强度和介电常数,促使外泌体沉淀下来。这种方法操作简便,但纯度相对较低。
每种方法都有其优缺点,在实际应用中,需要根据实验目的、样品特点和实验条件选择合适的提取与纯化方法。
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