细胞消化传代需注意以下事项:
首先,实验准备要充分。确保胰酶等试剂在有效期内且未受污染,准备好无菌的培养容器等耗材。提前预热新鲜培养基至适宜温度。
观察细胞状态很关键。在传代前通过显微镜判断细胞生长密度、形态及健康状况,一般细胞融合度达 80% - 90%时传代较合适。
消化操作要规范。严格按要求配制胰酶浓度,控制加入量以充分覆盖细胞。密切观察细胞形态变化,把握消化时间,防止过长损伤细胞或过短消化不充分。及时用含血清培养基终止消化,加入量要合适。
细胞收集时轻柔吹打,避免产生过多气泡和机械损伤。准确计数后按合适比例稀释并均匀接种到新容器。
*后,培养与观察不可少。设置好培养箱条件,传代后密切观察细胞贴壁和生长状态,出现问题及时分析处理。
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