核酸染料是实验室中用于检测和分析核酸(DNA和RNA)的重要工具。它们通过与核酸结合,在紫外光照射下发出荧光,从而实现对核酸的可视化。以下是一些常用的核酸染料种类及其特点:
1. Ethidium Bromide(EB,溴化乙锭)
• EB是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂,广泛用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。
• EB与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性,在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个EB分子。
• EB在紫外区302nm和366nm处有吸收峰,在紫外光的照射下,EB可被激发出橙红色的荧光(590nm)。
• 尽管EB灵敏度高且价格便宜,但它是一种强致癌诱变剂,对人体潜在危害非常大。
2. SYBR系染料
• SYBR系列核酸染料以其灵敏度和**性而大受欢迎,成为该品牌的明星产品之一。
• SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强。
• 不同种类的SYBR系核酸染料有不同的特点,如SYBR Green I主要结合DNA,而SYBR Green II主要结合RNA;SYBR Gold在灵敏度上有明显的优势;而SYBR Safe在**性上则更胜一筹。
3. Gel Red系染料
• GelRed是一种二聚体插层染料,具有独特的油性和大分子特点,与DNA的亲和力更大,是一种更灵敏、稳定和相对**的荧光核酸染色试剂。
• GelRed和GelGreen可以替代EB,用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA和ssDNA的染色。
• GelRed的灵敏度远高于EB,并且不需要脱色。由于GelRed和EB有相同的光谱特性,因此用它替代EB时不需要更换成像系统。
4. Goldview系染料
• Goldview是一种吖啶橙类核酸染料,也是一种可替代EB的新型核酸染料。
• Goldview与DNA发生结合并产生很强的荧光信号,灵敏度与EB相当。在紫外透射光下,双链DNA呈现绿色荧光,而单链DNA呈现红色荧光。
• Goldview虽然毒性较低,但仍具有一定的细胞毒性。因此,在使用时也需要做好防护措施。
5. 其他核酸染料
• 除了上述几种,还有其他一些核酸染料,如PicoGreen、YOYO染料系列等,它们在特定的应用中也有广泛的使用。
在选择核酸染料时,除了考虑灵敏度和稳定性,**性也是一个非常重要的考量因素。随着对EB毒性认识的深入,越来越多的实验室开始使用低毒或无毒的替代品,如SYBR系染料和Gel Red系染料。这些染料在提供高灵敏度的同时,也减少了对实验人员和环境的潜在危害。
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