等温扩增技术是一种在恒定温度下进行核酸扩增的方法，它不需要温度循环，因此操作简便且成本较低，特别适合于现场快速检测和资源有限的环境。以下是几种主要的等温扩增技术及其详细叙述：
1. 环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）
原理：
LAMP技术由日本学者Notomi等人于2000年报道。该技术在60-65℃条件下进行，需要4条引物和具有链置换功能的嗜热脂肪芽孢杆菌DNA聚合酶（Bst DNA聚合酶）。LAMP利用4到6个特异引物针对靶基因的6个区域，在恒温条件下快速扩增核酸，通常在15-60分钟内实现10^9至10^10倍的扩增。LAMP的引物设计包括外引物和内引物，内引物含有两段序列，能够形成环状结构，促进DNA的指数级扩增。
特点：
• 高特异性：在恒定高温下进行，减少了非特异性扩增。
• 快速反应：短时间内完成大量核酸的扩增。
• 简单检测：通过观察反应液的浑浊度变化即可判断扩增结果，无需复杂的电泳或紫外观察。
• 低成本：不需要昂贵的PCR仪和试剂，适合资源有限的环境。
2. 重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification, RPA）
原理：
RPA技术基于重组酶、单链结合蛋白和链置换DNA聚合酶介导的链侵入，在较低温度下进行等温扩增。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物能在双链DNA中寻找同源序列，一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。
特点：
• 快速：一般可在十分钟之内获得可检出水平的扩增产物。
• 高效：利用重组酶的高亲和力和特异性，提高扩增效率。
• 低温操作：相比LAMP，RPA可以在更低的温度下进行，减少了对设备的要求。
3. 滚环扩增（Rolling Circle Amplification, RCA）
原理：
RCA是一种将短DNA或RNA引物扩增长单链DNA或RNA的等温扩增技术，使用环状DNA作为模板和具有链置换活性的DNA聚合酶（如Phi29 DNA聚合酶）。RCA生成一个串联体，包含与环状模板互补的多个串联重复序列。
特点：
• 高效率：能够从单个环状DNA模板生成大量重复序列。
• 多样性：可以用于DNA和RNA的扩增，具有广泛的应用前景。
4. 多重置换扩增（Multiple Displacement Amplification, MDA）
原理：
MDA是一种全基因组扩增（Whole Genome Amplification, WGA）技术，利用链置换DNA聚合酶（如Phi29聚合酶）和随机六聚体引物在等温条件下对基因组进行扩增。
特点：
• 全基因组覆盖：能够对整个基因组进行均匀扩增。
• 高产量：适合于从微量样本中获取大量DNA。
5. 依赖核酸序列的扩增（Nucleic Acid Sequence-Based Amplification, NASBA）
原理：
NASBA是一种利用RNA作为模板的等温扩增技术，结合了逆转录和RNA的转录，可以在单一反应中同时进行RNA的扩增和检测。
特点：
• 直接从RNA模板扩增：适用于RNA病毒的检测。
• 实时监测：可以结合实时监测系统，提高检测的灵敏度和速度。
6. 依赖解旋酶的扩增（Helicase-Dependent Amplification, HDA）
原理：
HDA是一种利用解旋酶在等温条件下进行DNA扩增的技术，通过解旋酶的活性，实现DNA模板的快速扩增。
特点：
• 高速度：解旋酶的活性可以快速分离DNA双链，提高扩增效率。
• 特异性强：依赖于解旋酶的特异性识别，减少非特异性扩增。
这些等温扩增技术各有特点，适用于不同的应用场景，如现场快速检测、资源有限的地区以及需要快速响应的紧急情况。随着技术的发展，这些方法在分子诊断、病原体检测、食品**和环境监测等领域的应用越来越广泛。
凯奥嘉生物专注于医药、临床诊断、实验室封板膜,微孔板热封膜产品的开发、生产及销售,并可根据客户多样化需求进行产品定制与项目合作。 凯奥嘉生物致力于为客户提供更为合理优化的样本密封解决方案，持续助力生命健康产业的发展。