“WB”常见的意思是“Western Blot”,中文名为“蛋白质**印迹法”或“**印迹法”,它是一种在分子生物学、生物化学、**学等领域广泛应用的技术。
其基本原理是利用抗原抗体的特异性反应。首先通过 SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)技术将生物样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶上分离开,然后将蛋白转移到固相载体(如 PVDF 膜或硝酸纤维素膜)上。接着,以固相膜上的蛋白质作为抗原,与对应的一抗进行**反应,洗脱掉未结合的一抗后,再加入带有酶(如辣根过氧化物酶)标记的二抗,形成蛋白-一抗-二抗复合物。*后通过显色或荧光成像等方法检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白质,根据条带的位置和强弱可以实现蛋白鉴定和表达分析。
Western Blot 实验的常规流程包括:蛋白提取、蛋白定量、制胶、电泳、转膜、封闭、一抗孵育、一抗洗脱、二抗孵育、二抗洗脱、化学发光和数据分析等步骤。
该技术的一些优势包括:
• 可以鉴定某种蛋白,并对其进行定性和半定量分析;
• 能够同时检测多个目的蛋白;
• 可区分分子量相近的蛋白;
• 可准确定量;
• 具有低背景、高信噪比的特点;
• 线性范围更广,适合检测低丰度蛋白。
然而,Western Blot 方法也存在一些局限性,例如需要特异性抗体,对于一些蛋白质可能无法获得合适的抗体;需要较多的样品量,对于稀有蛋白质的研究可能受限;结果的解释需要结合其他实验数据和技术等。
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